New Tech pilnībā automātiska nukleīnskābju ekstrakcijas un noteikšanas iekārta

Pieci stiprumi:
● Instruments, kas konfigurēts ar nukleīnskābes ekstrakcijas un attīrīšanas posmu
● Instruments konfigurēts ar ultraskaņas ekstrakcijas moduli
● Instruments konfigurēts ar pilnībā automātisku
● Instruments konfigurēts ar mainīgu temperatūras pastiprinājumu
● Instruments konfigurēts ar pilnībā iekļautu reaģentu komplektu

1. Vai nukleīnskābju noteikšanas reaģenti ir jāekstrahē un jāattīra?
Nukleīnskābju noteikšanas princips ir šāds: praimera iedarbībā DNS polimerāzi izmanto, lai veiktu ķēdes reakcijas amplifikāciju uz veidnes DNS/RNS (nepieciešama NA reversā transkripcija), un pēc tam tiek noteikts atbrīvotā fluorescējošā signāla daudzums, lai noteiktu. vai paraugs satur nosakāmā patogēna nukleīnskābi (DNS/RNS).

1) Paraugi, kas nav ekstrahēti vai attīrīti, var saturēt daudzas sastāvdaļas, kas ietekmē gala rezultātu: nukleāzi (kas var izšķīdināt mērķa nukleīnskābi un izraisīt viltus negatīvu), proteāzi (kas var samazināt DNS polimerāzi un izraisīt viltus negatīvu), smago metālu. sāls (kas izraisa sintāzes inaktivāciju un izraisa viltus pozitīvu rezultātu), pārāk skābs vai pārāk sārmains PH (kas var izraisīt reakcijas neveiksmi), nepilnīga RNS (kas noved pie viltus negatīvas reversās transkripcijas kļūmes).

2) Dažus paraugus ir grūti pastiprināt tieši: grampozitīvus un dažus parazītus to biezo šūnu sieniņu un citu struktūru dēļ, ja tie neiziet cauri nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas procesam, komplekts bez ekstrakcijas var neizdoties. paraugi.

Tāpēc ir ieteicams izvēlēties testa komplektu vai instrumentu, kas konfigurēts ar nukleīnskābes ekstrakcijas soli.

2. Ķīmiskā ekstrakcija vai fizikālā ultraskaņas fragmentācijas ekstrakcija?
Vispārīgi runājot, lielāko daļu pirmapstrādes un attīrīšanas var izmantot ķīmisko ekstrakciju.Tomēr biezsienu grampozitīvās baktērijās un dažos parazītos arī ķīmiskā ekstrakcija nevar iegūt efektīvas nukleīnskābju veidnes, kā rezultātā tiek iegūts viltus negatīvs noteikums.Turklāt ķīmiskajā ekstrakcijā bieži tiek izmantoti spēcīgi līdzekļi, ja eluēšana nav rūpīga, reakcijas sistēmā ir viegli ievadīt spēcīgu sārmu, kā rezultātā tiek iegūti neprecīzi rezultāti.

Ultraskaņas sadrumstalotībā tiek izmantota fiziska drupināšana, ko veiksmīgi izmantojis GeneXpert, vadošais uzņēmums cilvēkiem paredzētās POCT jomā, un tam ir absolūtas priekšrocības dažu sarežģītu paraugu (piemēram, Mycobacterium tuberculosis) nukleīnskābju ekstrakcijā.

Tāpēc ir ieteicams izvēlēties testa komplektu vai instrumentu, kas konfigurēts ar nukleīnskābes ekstrakcijas soli.un tas ir optimāli, ja ir ultraskaņas ekstrakcijas modulis.

3. Manuāla, pusautomātiska un pilnībā automātiska?
Tā ir darbaspēka izmaksu un darba efektivitātes problēma.Patlaban lolojumdzīvnieku slimnīcas, kurās nav pietiekami daudz darbinieku, un nukleīnskābju ekstrakcija un noteikšana ir darbs, kas prasa noteiktas prasmes un pieredzi.Nav šaubu, ka pilnībā automātiskā nukleīnskābju ekstrakcijas un noteikšanas iekārta ir ideāla izvēle.

4. Pastāvīga temperatūras pastiprināšana vai mainīga temperatūras pastiprināšana?
Pastiprināšanas reakcija ir nukleīnskābes noteikšanas saite, un ar šo saiti saistītā profesionālā tehnoloģija ir sarežģīta.Aptuveni runājot, nukleīnskābes pastiprināšanai izmanto fermentus.Pastiprināšanas procesā tiek atklāts pastiprināts fluorescences signāls vai iegultais fluorescences signāls.Vispārīgi runājot, jo agrāk parādās fluorescences signāls, jo lielāks ir mērķa gēna saturs paraugā.

Pastāvīgas temperatūras pastiprināšana ir nukleīnskābes pastiprināšana fiksētā temperatūrā, savukārt mainīgas temperatūras pastiprināšana ir cikliska pastiprināšana stingri saskaņā ar denaturāciju-atkvēlināšanu-paplašināšanu.Ir veikts nemainīgas temperatūras pastiprināšanas laiks, savukārt mainīgās temperatūras pastiprināšanas laiku lielā mērā ietekmē instrumenta temperatūras paaugstināšanās un krituma ātrums (šobrīd daudzi ražotāji ir spējuši veikt 40 pastiprināšanas ciklus aptuveni 30 minūtēs).

Ja laboratorijas apstākļi ir labi un zonējums ir stingrs, var teikt, ka precizitātes atšķirība starp abiem nebūs liela.Tomēr mainīgas temperatūras pastiprināšana salīdzinoši īsākā laikā sintezēs vairāk nukleīnskābju produktu.Laboratorijās bez stingra zonējuma un profesionāla apmācības personāla nukleīnskābju aerosola noplūdes risks būs lielāks, viltus pozitīvs rezultāts rodas, tiklīdz notiek noplūde, un to ir ārkārtīgi grūti novērst.

Turklāt pastāvīgas temperatūras pastiprināšana ir arī vairāk pakļauta nespecifiskai pastiprināšanai, ja paraugs ir sarežģīts (relatīvā reakcijas temperatūra ir zemāka, un jo augstāka ir pagarinājuma temperatūra, jo labāka ir primera saistīšanās specifika).

Ciktāl tas attiecas uz pašreizējām tehnoloģijām, mainīgas temperatūras pastiprināšana ir uzticamāka.

5. Kā izvairīties no nukleīnskābju amplifikācijas produktu noplūdes riska?
Pašlaik daudzi ražotāji kā nukleīnskābes reakcijas cauruli izvēlas dziedzera tipa PCR cauruli, kas ir noslēgta ar berzi, un temperatūras denaturācija mainīgas temperatūras denaturācijā mainīgas temperatūras PCR amplifikācijā sasniedz 90 grādus.
Celsija .Atkārtots izplešanās process ar karstumu un saraušanās ar aukstumu ir liels izaicinājums PCR caurules blīvēšanai, un dziedzera tipa PCR caurulei ir samērā viegli izraisīt noplūdi.

Vēlams veikt reakciju ar pilnībā noslēgtu komplektu/cauruli, lai izvairītos no reakcijas produkta noplūdes.Būtu lieliski, ja varētu izstrādāt pilnībā noslēgtu komplektu nukleīnskābju ekstrakcijai un noteikšanai.

Tātad New Tech jaunajai pilnībā automātiskajai nukleīnskābju ekstrakcijas un noteikšanas iekārtai ir iepriekš minētās piecas optimālās izvēles iespējas.